NY∕T 3285-2018 播娘蒿对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程(农业)
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ID： |
032C2C91271B43848C68A7FFA13F407C |
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0.4 |
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7 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-29 |
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ICS 65.100,B 17 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3285一2018,播娘富对乙自先乳酸合成酶抑制剂类除草剂,靶标抗性检测技术规程,Guideline for the detection of Descurainia sophia (L.) Webb ex Prantl target-site,resistance to acetolactate synthase inhibiting herbicides,2018 - 07 - 27 发布2018 - 12 - 01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,目。吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由中华人民共和国农业农村部提出并归口,本标准起草单位:中国农业科学院植物保护研究所,本标准主要起草人:崔海兰、李香菊、于惠林、魏守辉、黄兆峰、李丹,NY/T 3285-2018,I,范围,播娘富对Z 酷乳酸合成酶抑制剂类除草剂,靶标抗性检测技术规程,NY/T 3285-2018,本标准规定了播娘富[Descurainia so ]对乙酷乳酸合成酶( acetolactate,synthase , ALS) 抑制剂类除草,本规程适用于播娘商对乙,2 规范性引用文件,下列文件对于本,件。凡是不注日期的,NY/ T 1667,NY/ T 1859.,3 术语和定义,3. 1,3. 2,3. 3,NY/ T 166,靶标抗性,由于除草剂,非靶标抗性,杂草对除草,整株生物测定,通过整株杂草生,地上部生物量受除草剂,3. 4,生长抑制中量,使杂草生物量降低50 % 的,3. 5,抗性指数resistance index (RI ),除草剂对杂草疑似抗药性种群与敏感种群的生长抑制中量的比值,3. 6,靶标基因突变阳咱仕site gene mutation,注意事项,由于靶标基因DNA 分子中碱基对的取代，导致mRNA 的某一密码子发生变化，从而引起编码的,氨基酸变成另一种氨基酸，最终导致靶标酶多肤链中的氨基酸序列发生改变,4 检测程序,4. 1 种子采集,1,NY/T 3285-2018,当播娘富种子成熟时，在疑似发生抗药性的田块采集种子。采样回块应具有代表性，面积不小于,667 m2 ，成熟种子量不少于2000 粒,及时晾干采集的种子，装人种子保存罐，置于阴凉干燥处保存,4. 2 材料培养,选择无播娘菌种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20 % ~30 % 的草炭土，混合均匀后装人直径,不小于10 cm 的培养钵;待测种群及敏感对照种子用o. 05 % ~0 . 1 % 的赤霉素溶液浸泡12 h~24 h 后冲,洗干净，均匀撒播在土壤表面，覆土O. 2 cm~O. 5 cm ，采用盆钵底部渗灌方式补充水分，置于150C~,25 0C ，光照时间8 h~10 h 条件下培养。待播娘蓄长至2 叶期，间苗，每盆保留长势一致的10 个植株,4. 3 生物测定,4. 3. 1 单剂量fi别法,待植株长至3 叶期，用待测除草剂(ALS 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，除草剂剂量采用敏,感种群的最低致死剂量，每个处理不少于4 次重复， 每个重复30 株。用药21 d 后，调查存活株数，按式,(1)计算株防效( % ) ,式中:,E = 旦k X 100 .. . ..…………….. .……………. (1),NT,E 一一一存活植株数占总处理植株数的百分比，单位为百分率( % );,NL 一一处理后存活植株数，单位为株;,NT一一处理植株总数，单位为株,4.3. 2 剂量反应曲线法,经单剂量瓢别法检测而明确有抗性的植株，进行繁殖，获得的种子用剂量反应曲线法进一步测定抗,药性指数,待植株长至3 叶期，用待测除草剂(ALS 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5,个剂量，每个剂量不少于4 次重复，每个重复10 株。以杂草鲜重或干重为指标，求出剂量反应方程，按,式(2) 计算生长抑制中量,式中:,y =c+ D-C …………………………………… (2),l 十(X/ GRSO )b,Y 在除草剂处理下杂草地上部分鲜重或干重与对照鲜重或干重的百分比，单位为百分率,( % );,C 一一待测指标下限，单位为百分率( % );,D 一一待测指标上限，单位为百分率( % );,X 一一除草剂剂量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ;,GRso 一一生长抑制中量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ;,b 一一斜率,按式(3) 计算抗药性指数R I ,RI G~~R~,"旦n旦r;> 晻 ?晻晻晻晻 ?晻晻???????晻???????晻晻 ?晻晻 ?晻晻晻晻 ?(3),GRsos,式中:,R I 一一抗药性指数;,GRSOR 一一抗药性种群生长抑制中量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ;,GRsos 一一-敏感'性种群生长抑制中量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ,4. 4 靶标基因检测,NY/T 3285-2018,4. 4. 1 DNA 提取,取杂草幼嫩叶片，约200 mg ，采用十六炕基三甲基澳化镀(CTAB) 法或商品化试剂盒提取总DNA,每个抗药性种群随机检测10 个~20 个抗药性植株,用1 %琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA 质量是否合格，电泳出现一条清晰明亮的条带，表示DNA,较完整、无降解,DNA 样品的纯度及浓度检测:用分光光度计测定DNA 溶液在260 nm 处的吸光值(OD260 ) 0 OD260,值等于1 时，样品中DNA 浓度为50 μg/ mL 。按式(4) 计算DN……
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